酶免疫法和间接免疫荧光法检测抗精子抗体方法的比较

郑卫东， 杨均， 郭亮， 瞿新 《郧阳医学院学报》 2006 年 6 月 第 25 卷 第 3 期
关键词：抗精子抗体；酶联免疫吸附试验；间接免疫荧光法；可比性；符合率

　　[关键词\] 抗精子抗体；酶联免疫吸附试验；间接免疫荧光法；可比性；符合率

　　 血清抗精子抗体（AsAb）阳性已被列为人类免疫性不育的确定指标之一\[1\]。在原因不明的不孕症妇女中，约有30%在血清中检测到AsAb\[2 \]。目前检测AsAb方法较多，国内多数实验室采用酶联免疫吸附试验（ELISA），部分实验室采用间接免疫荧光法（IIF）。为了解不同方法检测 AsAb的可比性及符合率，探讨影响AsAb检测准确性的因素。我们用上述两种方法检测94例不孕症患者血清，并将结果进行了比较。

　　1 材料和方法

　　1.1 病例来源

　　2005年1月~2005年3月在我院就诊的94例不孕症患者，年龄21～42岁，其中男性31例，女性63例。

　　1.2 试剂与仪器ELISA法试剂盒（浙江伊利康生物技术有限公司生产）；IIF法生物薄片试剂盒（德国欧蒙公司生产）。Anthos fluido自动洗板机、2010型酶标仪（奥地利Anthos公司生产），BH-2型荧光显微镜（日本Olympus公司生产）。

　　1.3 检测方法

　　1.3.1 采集血清:抽取患者静脉血3 ml，分离血清置2 ℃~8 ℃冰箱备检。将日常工作中用IIF法检测后的血清，收集后置于－18 ℃~－24 ℃冰箱保存，统一再用ELISA法检测。

　　1.3.2 ELISA法:将血清按1∶100稀释，严格按试剂使用说明书操作，每份标本分别检测AsAb的IgG,IgA，IgM三种抗体，洗板机洗板，显色终止后酶标仪上用450 nm波长，620 nm参考波长比色，依据试剂盒提供的判断公式判断结果，其中任意一项抗体A450≥0.21, 判为AsAb阳性，A450<0.21为阴性。

　　1.3.3 IIF法:将血清按1∶10稀释，严格按试剂盒使用说明书操作，在荧光显微镜下观察结果，以多数精子尾部或头尾呈现均匀、连续的荧光判为AsAb阳性。由于加入的荧光素标记抗体为羊抗人IgAGM型混合抗体，因此可一次检测AsAb的IgG, IgA，IgM三种抗体。

　　1.4 统计学处理两样本率的比较采用χ2检验。

　　2 结果

　　94例标本，IIF法共检出AsAb阳性 28例，阴性66例，阳性检出率29.7%（28/94）；ELISA法共检出AsAb阳性22例，阴性72例，阳性检出率23.4％（22/94）。两种方法的阳性检出率无显著性差异（P>0.05）。IIF法检出的28例AsAb阳性标本，ELISA法检测仅有11例阳性，17例阴性，阳性符合率仅为39.2％（11/28）；IIF法检出的66例AsAb阴性标本，ELISA法检测有55例阴性，11例阳性，阴性符合率为83.3％ (55/66)。

　　3 讨论

　　本研究结果显示，虽然ELISA法和IIF法检测AsAb的阳性检出率无显著性差异，但两法的可比性及符合率均不理想。产生这种现象的原因可能是由于两法在敏感性、特异性等主要指标方面存在差异，也可能是由于试剂质量存在差异所致。提示实验室在采用某种方法检测AsAb前，有必要用标准方法和拟采用方法进行比对试验，对方法学和试剂质量进行必要的评估。目前公认检测AsAb的标准方法是免疫珠实验（IBT），但IBT操作较为复杂，人为影响因素多，临床实验室较少采用。ELISA法检测AsAb由于操作简单，设备要求不高，因而被国内多数实验室采用。但ELISA法也易受多种因素干扰，试剂盒质量对检测结果准确性影响较为突出。我们曾试用过国内多家公司试剂，但结果均不太理想，要么阳性检出率偏低，要么显色后本底颜色较深，结果容易误判。IIF法检测AsAb, 荧光显微镜下可以清晰的看到完整的人精子荧光标记情况，结果容易判断，检测结果较为理想。但对于AsAb的阳性荧光模式，判断标准尚需统一。有文献\[3 \]将精子头部、中段出现特异性荧光判为AsAb阳性。实际工作中，我们观察到多数标本精子头部都会着染非特异性荧光，若依上述标准判断，会造成较多的假阳性结果。因此，我们认为应采用德国欧蒙公司的判断标准，以荧光显微镜下生物薄片包被区多数精子尾部或头尾部呈现均匀、连续的荧光判为AsAb阳性，较为合适。AsAb的检测目前在临床上已成为不孕症患者的常规检测指标之一。为了保证检测结果的准确性，建议有条件的实验室最好采用IIF法。但该法需要价格昂贵的荧光显微镜，因此在基层医院目前尚难普及和推广。

　　[参 考 文 献\]

　　[1\] 夏乾峰，覃 西，钱士军，等. 生物薄片法对不育患者血清抗精子抗体分析及其临床应用\[J\].临床检验杂志，2004，22（5）：370-371.
　　 [2\] 曹泽毅.中华妇产科学\[M\].北京：人民卫生出版社，1999：2 323-2 332.

　　[3\] 李影林.中华医学检验全书\[M\].北京：人民卫生出版社，1997：2 316-2 318.

　　（郧阳医学院附属人民医院检验部免疫室，湖北 十堰 442000）

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